EZsep™ C18固相萃取柱用于水產(chǎn)品中氯霉素的檢測(cè)

本文參照《GB 31658.2-2021 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 動(dòng)物性食品中氯霉素殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》，利用EZsepTMC18固相萃取柱（1000 mg/6mL，貨號(hào)：PZ10304）進(jìn)行凈化，再用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測(cè)進(jìn)行檢測(cè)，建立了一種對(duì)水產(chǎn)品中氯霉素的分析方法。

關(guān)鍵詞：

水產(chǎn)品，氯霉素，固相萃取，

1，  實(shí)驗(yàn)過(guò)程

1.1     儀器與試劑   

SPE1000 全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)，北京萊伯泰科儀器股份有限公司；

M64高通量平行濃縮儀，北京萊伯泰科儀器股份有限公司；

4500質(zhì)譜系統(tǒng)，SCIEX公司；

EZsepTMC18固相萃取柱（1000 mg/6mL，貨號(hào)：PZ10304），北京萊伯帕茲?rùn)z測(cè)科技有限公司；

冷凍離心機(jī)，GL-20G-Ⅱ，上海安亭科學(xué)儀器廠  ；  

甲醇（色譜純），購(gòu)自賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；

乙腈（色譜純），購(gòu)自賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；

正己烷（色譜純），購(gòu)自賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；

乙酸乙酯（色譜純），購(gòu)自賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；

氯化鈉（分析純），購(gòu)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2                      工作液配制

氯霉素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：100μg/mL，溶劑為甲醇，購(gòu)自壇墨質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心 。

氯霉素-D5標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：100μg/mL，溶劑為甲醇，購(gòu)自壇墨質(zhì)檢標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心 。

標(biāo)準(zhǔn)中間液:移取氯霉素儲(chǔ)備液和氯霉素-D5標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液各0.1mL，分別用甲醇稀釋至10mL容量瓶中，配制成濃度為1.0μg/mL的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)中間液及氯霉素-D5同位素標(biāo)準(zhǔn)中間液。

標(biāo)準(zhǔn)使用液:移取氯霉素中間液和氯霉素-D5標(biāo)準(zhǔn)中間液各1mL，分別用甲醇稀釋至10mL容量瓶中，配制成濃度為0.1μg/mL的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)使用液及氯霉素-D5同位素標(biāo)準(zhǔn)使用液。

分別移取0.1μg/mL的氯霉素標(biāo)準(zhǔn)使用液0、0.01、0.05、0.10、0.20、0.50mL分別置于10mL容量瓶中并加入氯霉素-D5同位素標(biāo)準(zhǔn)使用液0.2 mL以純水定容至刻度，標(biāo)準(zhǔn)濃度為0 μg/L、0.1 μg/L、0.5 μg/L、1 μg/L、2μg/L、5μg/L， 氯霉素-D5濃度固定為2μg/L。

1.3 實(shí)驗(yàn)部分

1.3.1 樣品制備

 取魚肉5g，加氯霉素-D5同位素標(biāo)準(zhǔn)使用液0.2 mL、乙腈5mL、4%氯化鈉溶液5mL，渦旋振蕩2min，4000r/min離心10min，取上清液，殘?jiān)貜?fù)提取1次，合并上清液。加正己烷5mL,渦旋振蕩1min，2000r/min離心10min，棄去上層液，正己烷重復(fù)處理1次。加水飽和的乙酸乙酯溶液5mL,渦旋振蕩1min，2000r/min離心10min，上層液轉(zhuǎn)移到20mL上樣瓶中，重復(fù)提取1次，合并提取液，氮?dú)獯蹈?，?mL5%乙腈水溶液溶解，混勻，備用待凈化。

1.3.2 固相萃取凈化 

EZsepTMC18固相萃取柱（1000 mg/6mL，貨號(hào)：PZ10304）用10mL甲醇、10mL水依次進(jìn)行活化，取1.3.1待凈化液上樣，上樣結(jié)束后用3mL、3mL水淋洗萃取柱，再用4mL 50%甲醇水溶液洗脫萃取柱，收集洗脫液，加水飽和乙酸乙酯4mL，渦旋振蕩1min，2000r/min離心5min，取上層液，重復(fù)處理1次，合并上層溶液，氮?dú)獯抵两筛?。?mL 50%甲醇水溶液溶解，混勻過(guò)微孔濾膜后供LC-MS/MS測(cè)定。

1.3.3 LC-MS/MS儀器條件

色譜柱：Shim-pack Velox C18（2.7μm，2.1*100mm）；

檢測(cè)方式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）；

流動(dòng)相：A:水-B: 甲醇（50:50）；

流速：0.2mL/min；

進(jìn)樣量：1μL；

2，                      實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖1 標(biāo)液色譜圖

圖2氯霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

3，                      結(jié)論 

本次實(shí)驗(yàn)展示了使用EZsepTMC18固相萃取柱（1000 mg/6mL，貨號(hào)：PZ10304）對(duì)水產(chǎn)品中氯霉素進(jìn)行凈化，通過(guò)高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜進(jìn)行測(cè)定，其加標(biāo)回收率在84.7%~105.2%之間，RSD在8.1%，能夠滿足標(biāo)準(zhǔn)要求。說(shuō)明EZsepTMC18固相萃取柱（1000 mg/6mL，貨號(hào)：PZ10304）能很好的完成方法中的凈化工作，并且結(jié)果穩(wěn)定、可靠。

4，                      參考文獻(xiàn)

1.       《GB 31658.2-2021 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 動(dòng)物性食品中氯霉素殘留量的測(cè)定 液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法》

表 1   加標(biāo)回收率結(jié)果