EZsep™ AFB&G免疫親和柱用于玉米中黃曲霉毒素B族的檢測(cè)

前言：

黃曲霉毒素B1（Aflatoxin B1，簡(jiǎn)寫為AFB1）是已知的化學(xué)物質(zhì)中致癌性非常強(qiáng)的一種，對(duì)人和動(dòng)物具有強(qiáng)烈的毒性，其毒性作用主要是對(duì)肝臟的損害。

黃曲霉毒素B1存在于土壤，動(dòng)植物各種堅(jiān)果，特別是花生和核桃中。在大豆、稻谷、玉米、通心粉、調(diào)味品、牛奶、奶制品、食用油等制品中也經(jīng)常發(fā)現(xiàn)黃曲霉毒素。一般以熱帶和亞熱帶等南方高溫、高濕地區(qū)受污染最為嚴(yán)重，食品中黃曲霉毒素的檢出率比較高。黃曲霉毒素耐熱，280℃才可裂解，故一般烹調(diào)加工溫度下難以被破壞。國(guó)家質(zhì)檢總局規(guī)定黃曲霉毒素B1是大部分食品的必檢項(xiàng)目之一。

本文參考《GB 5009.22-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中黃曲霉毒素B族和G族的測(cè)定 第三法為高效液相色譜-柱后衍生法》，利用EZsep^TM AFB&G免疫親和柱（3mL，20/pk，貨號(hào)：PZ24102）凈化樣品，再通過(guò)高效液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè)，建立了一種玉米中黃曲霉毒素B族的分析方法。

關(guān)鍵詞：

黃曲霉毒素B族，免疫親和，高效液相色譜

1 實(shí)驗(yàn)過(guò)程

1.1 儀器與試劑

SPE1000全自動(dòng)固相萃取系統(tǒng)，北京萊伯泰科儀器股份有限公司；

LC600二元高壓梯度高效液相色譜（北京萊伯泰科儀器股份有限公司）配光化學(xué)衍生器；

E.T.氮吹濃縮儀（貨號(hào)：C020017），北京萊伯帕茲?rùn)z測(cè)科技有限公司；

冷凍離心機(jī)，GL-20G-Ⅱ，上海安亭科學(xué)儀器廠；

EZsep^TM AFB&G免疫親和柱（3mL，20/pk，貨號(hào)：PZ24102），北京萊伯帕茲?rùn)z測(cè)科技有限公司；

甲醇（色譜純），購(gòu)自賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；

乙腈（色譜純），購(gòu)自賽默飛世爾科技（中國(guó)）有限公司；

超純水；

0.1%吐溫-水：1mL的吐溫-20，加水定容至1L。

1.2 工作液配制

乙腈中4種黃曲霉毒素混標(biāo)儲(chǔ)備液：1.0μg/mL，壇墨質(zhì)檢 。

黃曲霉毒素混標(biāo)中間液：移取黃曲霉毒素混標(biāo)儲(chǔ)備液1mL，用甲醇稀釋至10mL容量瓶中，配制成濃度為100ng/mL的中間液。

黃曲霉毒素混標(biāo)工作液：移取黃曲霉毒素混標(biāo)中間液1mL，用甲醇稀釋至10mL容量瓶中，配制成濃度為10ng/mL的工作液。

分別移取100ng/mL的黃曲霉毒素混標(biāo)中間液10μL、50μL、200μL、500μL、1 000μL至10 mL容量瓶中，用初始流動(dòng)相定容至刻度，得到濃度依次為0.1 ng/mL、0.5 ng/ml、2.0 ng/ml、5.0 ng/mL、10.0 ng/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.3 實(shí)驗(yàn)部分

1.3.1 樣品制備

 稱取5g玉米試樣(精確至0.01g)于50mL離心管中，加入20.0mL甲醇-水溶液(70+30)，渦旋混勻，用均質(zhì)器10000r/min上下震蕩均質(zhì)3 min，在6000r/min下離心20min。準(zhǔn)確移取4mL上清液，加入46mL0.1%吐溫-水，混勻，待凈化。

1.3.2 凈化與濃縮

將低溫保存的EZsep^TM AFB&G免疫親和柱（3mL，20/pk，北京萊伯帕茲?rùn)z測(cè)科技有限公司，貨號(hào)：PZ24102）恢復(fù)至室溫，待免疫親和柱內(nèi)原有液體流盡后，移取上述待凈化液上樣，上樣結(jié)束后用20mL水分2次淋洗萃取柱，之后在真空狀態(tài)下干燥1min，最后用2mL甲醇洗脫。洗脫液在40℃下氮吹濃縮至近干，再用流動(dòng)相定容至1 mL，渦旋混勻，0.22μm濾膜過(guò)濾，待檢測(cè)。

1.3.3 高效液相色譜檢測(cè)條件

色譜柱：Promosil C18（5μm，4.6*250mm）

波長(zhǎng)：激發(fā)波長(zhǎng)360nm，發(fā)射波長(zhǎng)440nm

流速：1.0mL/min

柱溫：40℃

進(jìn)樣量：20μL

流動(dòng)相：超純水：甲醇+乙腈（50+50）=68:32

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖1 標(biāo)準(zhǔn)樣品色譜圖

圖2 加標(biāo)樣品色譜圖

圖3空白樣品色譜圖

3 結(jié)論 

本實(shí)驗(yàn)使用EZsep^TM AFB&G免疫親和柱（3mL，20/pk，北京萊伯帕茲?rùn)z測(cè)科技有限公司，貨號(hào)：PZ24102）對(duì)玉米中黃曲霉毒素B族進(jìn)行凈化后通過(guò)高效液相色譜儀進(jìn)行檢測(cè)，該方法的加標(biāo)回收率在81.1%~93.2%之間，RSD在2.2%~2.7%之間?；厥章屎头€(wěn)定性滿足標(biāo)準(zhǔn)要求，說(shuō)明EZsep^TM AFB&G免疫親和柱能很好的完成方法中的凈化工作，并且結(jié)果穩(wěn)定、可靠。

4 參考文獻(xiàn)

[1] GB 5009.22-2016 食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中黃曲霉毒素B族和G族的測(cè)定 第三法高效液相色譜-柱后衍生法

表1  加標(biāo)回收率